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考馬斯亮藍染色測定蛋白質含量一、實驗原理考馬斯亮藍(CoomassieBrilliantBlue)測定蛋白含量存在著兩種不同顏色形式,紅色和藍色。此染料與蛋白質結合后顏色由紅色形式轉變藍色形式,zui大光吸收由465nm變成595nm。在一定蛋白質濃度范圍內,蛋白質和染料結合符合比爾定律(Beer’slaw),因此可以通過測定染料在595nm處吸收的增加量得到與其結合的蛋白質量。本法測定范圍為10~100µg蛋白質。由于該法簡單、迅速、干擾物質少、重復性好、靈敏度...
查看全文堿性磷酸酶的分離提取及比活力的測定一、實驗原理堿性磷酸酶(alkalinephosphataseEC3.1.3.1簡稱為ALPase)廣泛存于微生物界和動物界。ALPase能催化幾乎所有的磷酸單酯的水解反應,產生無機磷酸和相應的醇、酚或糖。它也可以催化磷酸基團的轉移反應,磷酸基團從磷酸酯轉移到醇、酚或糖等磷酸受體上。在磷的生物和化學循環(huán)過程中,ALPase起了及其重要的作用。在生物體內ALPase與磷的代謝直接相關,參與磷與鈣物質的消化、吸收、分泌以及骨骼的形成等生理生化過程...
查看全文酶的定義、特性及堿性磷酸酶于人體的意義一、酶的定義:酶(enzyme)是具有催化特定化學反應的蛋白質、RNA或其復合體.是生物催化劑,能通過降低反應的活化能加快反應速度,但不改變反應的平衡點.絕大多數(shù)酶的化學本質是蛋白質.二、酶的特性:1.性:酶的催化效率比無機催化劑更高,使得反應速率更快;2.專一性:一種酶只能催化一種或一類底物,如蛋白酶只能催化蛋白質水解成多肽;3.多樣性:酶的種類很多,大約有4000多種;4.溫和性:是指酶所催化的化學反應一般是在較溫和的條件下進行的;5...
查看全文Folin-酚試劑法(Lowry法)測定蛋白質含量一、實驗原理蛋白質含有兩個以上的肽鍵(—CO—NH),因此有雙縮脲反應,在堿性溶液中,能與CU2+形成絡合物。Folin-酚試劑反應是在雙縮脲反應的基礎上,引進Folin試劑(磷鉬酸-鎢酸試劑),蛋白質-銅絡合物能還原磷鉬酸-磷鎢酸試劑,生成藍色物質。在一定條件下,藍色強度與蛋白質的量成正比例。本法的優(yōu)點是操作簡便、靈敏度高、較此外吸收法靈敏10~20倍,較雙縮脲法靈敏100倍,反應約在15min內有zui大顯色,并至少可穩(wěn)定...
查看全文Hanus法測定不飽和脂肪酸的碘價一、實驗原理在適當條件下,不飽和脂肪酸的不飽和鍵能與碘、溴或氯起加成反應。脂肪分子中如含有不飽和脂?;?,即能吸收碘。100g脂肪所吸收碘的克數(shù)稱為碘價。碘價的高低表示脂肪不飽和程度的大小。由于碘與脂肪的加成作用很慢,故于Hanus試劑中加入適量溴,使產生溴化碘,再與脂肪作用。過量的溴化碘與脂肪作用后,測定溴化碘剩余量即可求得脂肪之碘價,本法的反應如下:二、實驗用品(一)器材(1)碘價滴定瓶(250~300ml),或用具塞錐形瓶代替。(2)量筒...
查看全文蔬菜中膳食纖維的藥學價值和危害定儀:膳食纖維是指不能被人體消化道酵素分解的多糖類及木植素。英國國家顧問委員會建議膳食纖維攝入量為人均25-30g/天;美國FDA推薦的總膳食纖維攝入量為人均每日20-35g(成人);澳大利亞有關機構指出,人均每日攝入膳食纖維25g,可明顯減少冠心病的發(fā)病率和死亡率。中國營養(yǎng)學會2000年提出:我國成年人膳食纖維的適宜攝入量為每天30g左右。但據(jù)測算,我國人均每日的實際攝入量僅為14克左右,攝入量嚴重不足,且攝入量隨食品精加工水平的提高呈逐步下降...
查看全文微量凱氏定氮法測定蛋白質總含量一、實驗原理天然有機物(如蛋白質和氨基酸等化合物)的總氮量通常用微量凱氏定氮法(micro-kjeldahlmethod)來測定。當被測的天然含氮化合物與濃硫酸共熱時分解出氨,氨與硫酸反應生成硫酸銨,此過程稱為消化。由于消化過程進行緩慢,實驗中常添加硫酸鉀和硫酸銅的混合物來促進,硫酸銅是催化劑,硫酸鉀可提高消化液的沸點。氧化劑過氧化氫也能加速反應。消化完成后,在凱氏定氮儀中加入強堿堿化消化液,使碳酸銨分解出氨。用水蒸汽蒸餾法將氨蒸入無機酸溶液中,...
查看全文膳食纖維的測定-標準方法一、實驗原理膳食纖維又稱為植物細胞壁,它包括纖維素、半纖維素、木質素、果膠、角質和二氧化硅等。本實驗用中性洗滌纖維測定法測定,該法所測的膳食纖維為不被人消化系統(tǒng)中的酶所消化,也不被中性洗滌劑溶解的組分。其原理是樣品經熱的中性洗滌劑浸煮后,殘渣用熱的蒸餾水充分洗滌,除去樣品中游離淀粉、蛋白質、礦物質,然后加入α淀粉酶溶液以水解結合態(tài)的淀粉,再用蒸餾水,丙酮依次洗滌,以除去殘存的脂肪、色素等,殘渣經烘干,即為不溶性膳食纖維。二、實驗用品(一)器材(1)電熱...
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